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索萊寶紅細胞裂解液使用方法
2025-09-24 紅細胞裂解液是一種去除紅細胞非常簡便易行的方法，然而各廠家的紅細胞裂解液使用方法又不盡相同。下面就以索萊寶所產(chǎn)的紅細胞裂解液為例詳細說明使用方法。紅細胞裂解液是利用細胞內(nèi)外存在鹽離子濃度差而導致細胞膜脹破的原理來裂解無核紅細胞的。紅細胞裂解液經(jīng)無菌處理，主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細胞的分離純化，淋巴細胞的分離純化以及組織細胞蛋白與核酸提取等實驗中紅細胞的去除。紅細胞裂解液使用說明：1.1倍體積的新鮮全血，加入3倍體積的紅細胞裂解液。如1ml新鮮全血加入3ml紅細胞裂解液，輕輕...
蛋白酶k的作用及使用方法
2025-09-24 蛋白酶K，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。蛋白酶K的應(yīng)用比較廣泛。包括制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)(pH4-12.5)均有活性。蛋白酶K的主要作用：蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以增加探針與靶核酸結(jié)合的機會，提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時，都會對細胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導...
動物基因組DNA提取方法及步驟介紹
2025-09-24 基因組DNA提取是最常見分子生物學實驗之一。今天給大家介紹的是動物基因組DNA提取。DNA是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學研究的主要對象，為了進行測序、雜交、基因表達、文庫構(gòu)建等實驗，獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提，因此基因組DNA的提取也是分子生物學試驗技術(shù)中最重要、最基本的操作之一。動物基因組DNA提取實驗步驟：1、取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織...
胸腺嘧啶核苷的原理及配置方法
2025-09-22 應(yīng)用：胸腺嘧啶核苷為生化試劑，制備生物培養(yǎng)基，例如HAT選擇性培養(yǎng)基的制備。原理：在單抗制備中，由于需要進行選擇性殺死非目標細胞，所以使用添加HAT的選擇性培養(yǎng)基，其依據(jù)是細胞中的DNA合成有兩條途徑：一條途徑是生物合成途徑（“D途徑”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，為DNA分子的合成提供原料。在此合成過程中，葉酸作為重要的輔酶參與這一過程，而HAT培養(yǎng)液中氨基蝶呤是一種葉酸的拮抗物，可以阻斷DNA合成的“D途徑”。另一條途徑是應(yīng)急途徑或補救途徑（“S途徑”），它...
簡述TBST緩沖液的配制及應(yīng)用
2025-09-22 TBST中含有Tris-Hcl，NaCl，Tween20這三種物質(zhì)，是做WESTERNBLOT中常用的一種緩沖液。TBST緩沖液的配制1000ml×TBST的配置先稱量NaCl40g，倒入燒杯中，加DDW蒸餾水400ml,再稱量NaCl47.6g，倒入剛才的那個燒杯中（PS：由于NaCl的量太多，一次稱量不方便，所以分兩次稱量，且易于溶解）。往燒杯中加入Tris—HCl緩沖液100ml，最后加（吐溫20）5ml,轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中，在定容，轉(zhuǎn)移即可。TBST緩沖液的應(yīng)用...
DMEM培養(yǎng)基中DMEM粉劑配制方法步驟
2025-09-22 DMEM是現(xiàn)今細胞培養(yǎng)中比較常見的培養(yǎng)基之一，dmem培養(yǎng)基是建立在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研究出來的，它與MEM培養(yǎng)基相比較，DMEM培養(yǎng)基中加大了MEM培養(yǎng)基中各種成分的用量，下文主要介紹一下自己配制DMEM的方法。1制備新鮮三蒸水或Millipore超純水。2稱取所需量的干粉培養(yǎng)基，加入約終體積一半的三蒸水中;若配制一個包裝的培養(yǎng)液，在將整個包裝的干粉倒入三蒸水后，需用水洗包裝袋內(nèi)面2次，倒入培養(yǎng)液中，以保證所有干粉都溶解成培養(yǎng)液。磁力攪拌或人工攪拌使之充分溶解。3根據(jù)包裝...
簡述tbst與pbst的區(qū)別及配置
2025-09-22 TBST是TBS+Tween的縮寫，生物實驗中提到的PBST是指PBS溶液加上Tween-20。那么tbst與pbst都有上面區(qū)別呢？tbst與pbst的區(qū)別：1、TBST的pH值隨溫度變化大一點，而PBST似乎容易有沉淀，若稀釋抗體后需要反復使用的話建議使用TBST溶解。2、兩種洗液用起來沒有什么區(qū)別，都是提供一個緩沖的PH值環(huán)境，加上吐溫20有助于蛋白的洗脫。PBST的磷酸鹽緩沖液加Tween-20，而TBST是Tris緩沖液加Tween-20。PBS溶液是指磷酸緩沖液(...
剛果紅培養(yǎng)基的配方及原理
2025-09-22 纖維素剛果紅培養(yǎng)基用于纖維素分解菌的分離和鑒別，纖維素分解菌周圍有紅色分解圈。剛果紅培養(yǎng)基的配方：硝酸鈉1.0磷酸氫二鈉1.2磷酸二氫鉀0.9硫酸鎂0.5氯化-鉀0.5酵母浸出粉0.5酸水解酪蛋白0.5剛果紅0.2纖維素粉5.0瓊脂15.0pH值7.0±0.125℃剛果紅培養(yǎng)基的用法：稱取本品25.3g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。纖維素剛果紅培養(yǎng)基篩選菌種的原理:1、剛果紅可以跟大分子多糖牢固結(jié)合。2、纖維素是大分子多...

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